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酶抑制分光光度法介紹
時間:2014-08-21 15:31:04 作者: 來源:轉載 點擊:1361次

        由(you)農(nong)(nong)藥(yao)殘(can)留快速(su)(su)(su)檢(jian)(jian)(jian)測儀(yi)生化檢(jian)(jian)(jian)測法(fa)(fa)開(kai)發的速(su)(su)(su)測卡法(fa)(fa)(酶抑制顯色紙(zhi)片法(fa)(fa))和(he)(he)速(su)(su)(su)測儀(yi)法(fa)(fa)(酶抑制分(fen)光光度法(fa)(fa)),前(qian)者在(zai)(zai)80年(nian)代在(zai)(zai)省(sheng)級(ji)部(bu)門小范圍(wei)使用過(guo),后被(bei)后者取(qu)代。目前(qian)我(wo)省(sheng)廣(guang)(guang)泛(fan)使用農(nong)(nong)藥(yao)殘(can)留檢(jian)(jian)(jian)測方(fang)(fang)法(fa)(fa)主(zhu)要有兩大類—色譜(pu)檢(jian)(jian)(jian)測法(fa)(fa)和(he)(he)速(su)(su)(su)測儀(yi)法(fa)(fa)。色譜(pu)檢(jian)(jian)(jian)測法(fa)(fa)用作農(nong)(nong)殘(can)定(ding)量分(fen)析(xi),可(ke)為農(nong)(nong)藥(yao)殘(can)留執法(fa)(fa)提供依(yi)據(ju),主(zhu)要分(fen)布在(zai)(zai)省(sheng)級(ji)相關部(bu)門,部(bu)分(fen)地(di)(di)州也(ye)具有一定(ding)的檢(jian)(jian)(jian)測能(neng)力。速(su)(su)(su)測儀(yi)法(fa)(fa)只能(neng)作農(nong)(nong)殘(can)定(ding)性分(fen)析(xi),但(dan)它具有短時間能(neng)夠檢(jian)(jian)(jian)測大量樣本(ben)、檢(jian)(jian)(jian)測成本(ben)低,對于(yu)檢(jian)(jian)(jian)測人員(yuan)技術(shu)水平要求低,易于(yu)在(zai)(zai)基(ji)層推廣(guang)(guang)等(deng)特點,是目前(qian)我(wo)國(guo)控(kong)制高毒農(nong)(nong)藥(yao)殘(can)留的一種有效方(fang)(fang)法(fa)(fa),也(ye)是目前(qian)國(guo)內和(he)(he)我(wo)省(sheng)應(ying)用最為廣(guang)(guang)泛(fan)的農(nong)(nong)藥(yao)殘(can)留快速(su)(su)(su)檢(jian)(jian)(jian)測方(fang)(fang)法(fa)(fa)。廣(guang)(guang)泛(fan)用于(yu)蔬菜(cai)、水果(guo)生產(chan)基(ji)地(di)(di)和(he)(he)批發市場等(deng),主(zhu)要用來防止有機磷和(he)(he)氨基(ji)甲酸(suan)酯類農(nong)(nong)藥(yao)殘(can)留嚴重(zhong)超(chao)標的蔬菜(cai)和(he)(he)水果(guo)流入市場。

     ;   一、有機(ji)磷農藥(yao)(yao)和(he)氨基甲酸酯農藥(yao)(yao)的作用機(ji)理


         有(you)機磷和氨基甲酸酯(zhi)(zhi)類農藥能(neng)(neng)抑制(zhi)昆(kun)蟲神經(jing)中(zhong)樞和周圍神經(jing)系(xi)統中(zhong)乙酰膽(dan)(dan)堿(jian)(jian)(jian)(jian)酶(mei)(mei)的(de)(de)(de)活(huo)性,造成神經(jing)傳導介質(zhi)乙酰膽(dan)(dan)堿(jian)(jian)(jian)(jian)的(de)(de)(de)積(ji)累,影響正常傳導,使昆(kun)蟲中(zhong)毒致死。如果有(you)有(you)機磷農藥存在,有(you)機磷農藥就與膽(dan)(dan)堿(jian)(jian)(jian)(jian)酯(zhi)(zhi)梅(mei)結合,膽(dan)(dan)堿(jian)(jian)(jian)(jian)酯(zhi)(zhi)酶(mei)(mei)就不(bu)能(neng)(neng)分解乙酰膽(dan)(dan)堿(jian)(jian)(jian)(jian)為乙酸和膽(dan)(dan)堿(jian)(jian)(jian)(jian),造成乙酰膽(dan)(dan)堿(jian)(jian)(jian)(jian)在神經(jing)肌(ji)接頭和體內(nei)其它部位的(de)(de)(de)過量積(ji)聚,引起一系(xi)列神經(jing)中(zhong)毒癥狀。


 ;           二、乙酰膽堿酯酶抑制法(酶法)的作用原理


        從(cong)生(sheng)(sheng)(sheng)物化學(xue)(xue)的(de)(de)(de)(de)角度(du)看,有(you)機磷農(nong)(nong)(nong)藥(yao)和(he)(he)氨基(ji)甲(jia)(jia)酸(suan)酯農(nong)(nong)(nong)藥(yao)與乙(yi)酰膽(dan)堿(jian)(jian)是競爭性(xing)作用(yong)于(yu)膽(dan)堿(jian)(jian)酯酶(mei)(mei)的(de)(de)(de)(de),即膽(dan)堿(jian)(jian)酯酶(mei)(mei)可以與乙(yi)酰膽(dan)堿(jian)(jian)結合,催化乙(yi)酰膽(dan)堿(jian)(jian)生(sheng)(sheng)(sheng)成(cheng)乙(yi)酰和(he)(he)膽(dan)堿(jian)(jian),另(ling)一方面,如果膽(dan)堿(jian)(jian)酯酶(mei)(mei)與有(you)機磷農(nong)(nong)(nong)藥(yao)結合,就阻斷了反應(ying)的(de)(de)(de)(de)進行。根據這個原(yuan)理,就可以利用(yong)膽(dan)堿(jian)(jian)酯酶(mei)(mei)的(de)(de)(de)(de)催化反應(ying)的(de)(de)(de)(de)抑(yi)制法(fa),設計一種(zhong)通過顏色變化的(de)(de)(de)(de)直(zhi)觀的(de)(de)(de)(de)檢測(ce)方法(fa),來(lai)快(kuai)速檢測(ce)有(you)機磷農(nong)(nong)(nong)藥(yao)和(he)(he)氨基(ji)甲(jia)(jia)酸(suan)酯農(nong)(nong)(nong)藥(yao)的(de)(de)(de)(de)殘留(liu)情況。因(yin)此,生(sheng)(sheng)(sheng)物化學(xue)(xue)法(fa)(酶(mei)(mei)法(fa))就是利用(yong)某(mou)種(zhong)酶(mei)(mei)受(shou)影響的(de)(de)(de)(de)程(cheng)度(du)來(lai)反映農(nong)(nong)(nong)產品中農(nong)(nong)(nong)藥(yao)殘留(liu)量(liang)。


        三、速測儀法(酶(mei)抑(yi)制分光(guang)光(guang)度法)方(fang)法原理


        乙酰(xian)膽(dan)(dan)堿(jian)酯酶(mei)水(shui)解后,水(shui)解產物(wu)可(ke)與顯色劑反(fan)應(ying)(ying)(ying)產生(sheng)顏色,有機磷和(he)氨基(ji)甲酸(suan)(suan)酯類農(nong)(nong)藥可(ke)以抑制乙酰(xian)膽(dan)(dan)堿(jian)酯酶(mei)的活性,使這種酶(mei)不能被水(shui)解,從而無顯色反(fan)應(ying)(ying)(ying)。在(zai)溶(rong)液中(zhong)(zhong)加入(ru)乙酰(xian)膽(dan)(dan)堿(jian)酯酶(mei)和(he)顯色劑,用此判(pan)斷(duan)有機磷和(he)氨基(ji)甲酸(suan)(suan)酯類農(nong)(nong)藥殘留(liu)是(shi)否存(cun)在(zai)。在(zai)溶(rong)液中(zhong)(zhong)反(fan)應(ying)(ying)(ying)后,用分光光度計測定吸光值隨時間的變(bian)化(hua),計算出抑制率,以此判(pan)斷(duan)蔬菜中(zhong)(zhong)含有機磷和(he)氨基(ji)甲酸(suan)(suan)酯類農(nong)(nong)藥殘留(liu)的情況。


        四、速測(ce)儀法的優缺點:


        優點:在(zai)于簡單方便,快(kuai)捷、成本低廉。整個檢測(ce)過程只需30分(fen)鐘左右,它可以作為(wei)傳統(tong)儀器分(fen)析(xi)方法的(de)有益補充,針對市場(chang)、農場(chang)蔬菜農藥殘留量進行快(kuai)速篩選監測(ce),保(bao)證上市蔬菜食用的(de)相對安全性。


缺點:酶試劑(ji)易失活(huo),導致反應不穩(wen)定,檢測(ce)結(jie)果誤(wu)差較大(da),重復性不好,實際應用中的確認率大(da)約為60%~70%左(zuo)右;存(cun)在檢測(ce)盲區(qu),只(zhi)能(neng)檢測(ce)有機磷和氨基甲酸(suan)酯(zhi)兩(liang)類(lei)(lei)農藥,不能(neng)檢測(ce)有機氯(lv)類(lei)(lei)、菊酯(zhi)和其它類(lei)(lei)別(bie)的劇毒農藥;不適合檢測(ce)蔥蒜類(lei)(lei)、香(xiang)菜、韭菜、番茄、胡蘿卜(bu)、茭(jiao)白、蘑(mo)菇、花椒等14種容易出(chu)(chu)(chu)現假陽性的農產品;需要對(dui)(dui)檢測(ce)人員進行(xing)專門培訓(xun),否(fou)則將(jiang)會對(dui)(dui)出(chu)(chu)(chu)現的問題無法正確處理(li)或判斷,得出(chu)(chu)(chu)錯誤(wu)的結(jie)果。


本文關鍵詞:酶抑制分光光度法

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