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ELISA試(shi)驗(yan)以(yi)靈敏度較(jiao)高、特異(yi)性較(jiao)好的(de)(de)(de)特點在(zai)臨床上得(de)到了(le)廣泛的(de)(de)(de)應用，但操作中的(de)(de)(de)各個環(huan)節對(dui)試(shi)驗(yan)的(de)(de)(de)檢測效果影(ying)響較(jiao)大(da)，如不注意，有可(ke)能導致顯色(se)不全(quan)、花板等(deng)結果。我將操作中各個環(huan)節常出現問(wen)題的(de)(de)(de)原因及(ji)解(jie)決辦法總結于下，以(yi)期給同(tong)行帶(dai)來一些啟發，提高試(shi)驗(yan)質(zhi)量。
下面分析(xi)Elisa試驗操作(zuo)中(zhong)可(ke)能影響結果的原(yuan)因，并給出相(xiang)應的解(jie)決辦法
1 選擇試(shi)劑(ji)(ji)(ji) 選擇質量優良的檢測試(shi)劑(ji)(ji)(ji)，嚴格按照(zhao)試(shi)劑(ji)(ji)(ji)說明書進行操作(zuo)，操作(zuo)前(qian)將試(shi)劑(ji)(ji)(ji)在室溫下平(ping)衡30-60分鐘。
2 加(jia)(jia)樣(yang)(yang) 可能(neng)原因： 1）血(xue)清或(huo)血(xue)漿標(biao)本(ben)(ben)分(fen)(fen)離不好(hao)(hao)即(ji)進行加(jia)(jia)樣(yang)(yang)； 2）手工操(cao)作(zuo)中，加(jia)(jia)樣(yang)(yang)板(ban)過(guo)多造成(cheng)加(jia)(jia)樣(yang)(yang)后(hou)放入孵(fu)箱(xiang)(xiang)前等待時(shi)間過(guo)長(chang)（特別是室內(nei)溫度較高時(shi)）； 3）加(jia)(jia)完(wan)標(biao)本(ben)(ben)再(zai)加(jia)(jia)酶試(shi)(shi)劑時(shi)酶濺出孔(kong)外。解決辦法： 1） 標(biao)本(ben)(ben)為(wei)血(xue)清：最好(hao)(hao)將血(xue)液(ye)先(xian)自(zi)(zi)然存(cun)放1-2小時(shi)后(hou)，再(zai)用(yong)3000rmp離心15分(fen)(fen)鐘；標(biao)本(ben)(ben)為(wei)血(xue)漿：必須使用(yong)含抗凝劑的血(xue)液(ye)標(biao)本(ben)(ben)收集(ji)管(guan)(guan)，采(cai)血(xue)后(hou)必須立(li)即(ji)顛倒采(cai)血(xue)管(guan)(guan)混合5-10次，放置(zhi)一段時(shi)間后(hou)，3000rpm離心15分(fen)(fen)鐘；若在(zai)幾(ji)天內(nei)檢測，可放在(zai)2-8℃冰箱(xiang)(xiang)中，若要貯(zhu)存(cun)，則(ze)置(zhi)于-20℃的低(di)溫冰箱(xiang)(xiang)內(nei)。 2） 加(jia)(jia)樣(yang)(yang)后(hou)及(ji)時(shi)放入孵(fu)箱(xiang)(xiang)。 3） 加(jia)(jia)酶試(shi)(shi)劑后(hou)用(yong)吸水(shui)紙在(zai)酶標(biao)板(ban)表面輕(qing)拭吸干。 4） 如果采(cai)用(yong)AT或(huo)其(qi)他全自(zi)(zi)動加(jia)(jia)樣(yang)(yang)，最好(hao)(hao)選擇(ze)FAME或(huo)其(qi)他后(hou)處理儀器加(jia)(jia)酶試(shi)(shi)劑。 5） 標(biao)本(ben)(ben)較多時(shi)，請(qing)分(fen)(fen)批操(cao)作(zuo)。
3 孵(fu)育(yu) 可(ke)能原因(yin)： 1） 孵(fu)育(yu)時(shi)(shi)未貼封片(pian)或(huo)加(jia)蓋，使標本(ben)或(huo)稀釋液蒸發，吸(xi)附于(yu)孔壁，難(nan)于(yu)清洗徹底； 2） 孵(fu)育(yu)時(shi)(shi)間人(ren)為延長，導(dao)致非特異性結合緊附于(yu)反(fan)應(ying)孔周圍，難(nan)以清洗徹底。解決辦(ban)法： 1） 貼封片(pian)或(huo)加(jia)蓋； 2） 按說明步驟嚴格(ge)控制操(cao)作時(shi)(shi)間。
4 洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban) 可(ke)能原因： 1） 采用(yong)手工(gong)洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban),孔(kong)與孔(kong)之間液(ye)體交叉。 2） 采用(yong)半自動洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban)機洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban)時(shi)，洗(xi)(xi)(xi)液(ye)量不(bu)足，導致(zhi)洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban)不(bu)徹底；洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban)針(zhen)堵塞，抽吸不(bu)完全；洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban)不(bu)暢(chang)，導致(zhi)洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban)效果差。 3） 反(fan)應(ying)板(ban)(ban)(ban)過多造成洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban)等待時(shi)間長。 解(jie)決辦法(fa)： 1） 保證洗(xi)(xi)(xi)液(ye)注滿各孔(kong)，洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban)針(zhen)暢(chang)通，洗(xi)(xi)(xi)完板(ban)(ban)(ban)后最好在(zai)吸水紙(zhi)（選擇干(gan)凈、無或少塵的吸水材(cai)料）上輕輕拍干(gan)； 2） 合理安排，或多用(yong)幾臺洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban)機。
5 顯(xian)(xian)(xian)色 可能原因(yin)： 1） 顯(xian)(xian)(xian)色劑(ji)(ji)(ji)(ji)配制后放置時(shi)間過(guo)長或使用(yong)過(guo)期(qi)顯(xian)(xian)(xian)色劑(ji)(ji)(ji)(ji)； 2） 加顯(xian)(xian)(xian)色劑(ji)(ji)(ji)(ji)時(shi)濺出孔(kong)外造(zao)成(cheng)液體回流。解(jie)決辦法： 1） 顯(xian)(xian)(xian)色劑(ji)(ji)(ji)(ji)盡量在臨用(yong)前配制，堅持不(bu)(bu)用(yong)過(guo)期(qi)顯(xian)(xian)(xian)色劑(ji)(ji)(ji)(ji)，肉眼可見(jian)淺藍色的(de)TMB顯(xian)(xian)(xian)色劑(ji)(ji)(ji)(ji)不(bu)(bu)用(yong)； 2） 加樣(yang)時(shi)保持顯(xian)(xian)(xian)色劑(ji)(ji)(ji)(ji)不(bu)(bu)外流； 3） A、B液應(ying)避免接觸金屬器械。
6 終止(zhi) 可能原因如加(jia)終止(zhi)液(ye)時產生較多(duo)氣(qi)泡，導(dao)致假陽(yang)性增加(jia)。所以在加(jia)終止(zhi)液(ye)時應避免(mian)產生氣(qi)泡。
7 讀(du)板(ban) 如讀(du)板(ban)時板(ban)底不清潔(jie)等。應保證酶標板(ban)清潔(jie)。
所(suo)以在整(zheng)個(ge)操作過程中(zhong)保證酶標(biao)板不接觸次氯酸; 盡可(ke)能實現ELISA檢測(ce)標(biao)準自動化，有效提高檢測(ce)質量。
在(zai)實際操(cao)作(zuo)(zuo)中(zhong)，除了選擇優良試(shi)劑外(wai)，必(bi)須嚴格(ge)按照操(cao)作(zuo)(zuo)步驟(zou)進行操(cao)作(zuo)(zuo)，同時作(zuo)(zuo)好室內質(zhi)(zhi)(zhi)控(kong)、室間質(zhi)(zhi)(zhi)評，以嚴謹的工(gong)作(zuo)(zuo)作(zuo)(zuo)風檢測每一份標(biao)本，才能(neng)保證檢測質(zhi)(zhi)(zhi)量(liang)。現在(zai)國內已(yi)有(you)相當數(shu)量(liang)的單位(wei)擁有(you)全自動(dong)酶標(biao)儀，這對(dui)于(yu)實現ELISA標(biao)準化(hua)檢測、提高檢測質(zhi)(zhi)(zhi)量(liang)起到了重要作(zuo)(zuo)用(yong)。
本文關鍵詞：ELISA中(zhong)常見問題(ti)及解(jie)決方(fang)法(fa)
