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ELISA試驗(yan)以靈敏度較(jiao)高、特異性較(jiao)好的(de)(de)特點在臨床上得到(dao)了(le)廣(guang)泛的(de)(de)應用，但操(cao)作中(zhong)的(de)(de)各(ge)個(ge)環(huan)節(jie)對試驗(yan)的(de)(de)檢測效果影響較(jiao)大，如不注(zhu)意，有可(ke)能(neng)導致顯色不全、花(hua)板等結(jie)果。我將操(cao)作中(zhong)各(ge)個(ge)環(huan)節(jie)常出現問(wen)題的(de)(de)原因(yin)及解決辦法總結(jie)于下，以期給同行帶來一些啟發，提高試驗(yan)質量。
下面分析Elisa試(shi)驗(yan)操作中可能影(ying)響結果的(de)原因，并給出相應(ying)的(de)解決辦法
1 選(xuan)擇試(shi)(shi)劑 選(xuan)擇質(zhi)量優良(liang)的(de)檢測試(shi)(shi)劑，嚴(yan)格按照(zhao)試(shi)(shi)劑說明書進行操(cao)作，操(cao)作前將試(shi)(shi)劑在室溫(wen)下(xia)平(ping)衡30-60分鐘。
2 加(jia)(jia)樣 可能原(yuan)因： 1）血(xue)清(qing)或血(xue)漿標(biao)(biao)本(ben)(ben)分離(li)不好即進行加(jia)(jia)樣； 2）手工操作中，加(jia)(jia)樣板(ban)過多造成加(jia)(jia)樣后(hou)放(fang)(fang)(fang)(fang)入孵(fu)箱前等待時(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)間過長（特別是室(shi)內(nei)溫度較高時(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)）； 3）加(jia)(jia)完(wan)標(biao)(biao)本(ben)(ben)再加(jia)(jia)酶(mei)試劑時(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)酶(mei)濺出孔(kong)外(wai)。解決(jue)辦(ban)法： 1） 標(biao)(biao)本(ben)(ben)為血(xue)清(qing)：最好將(jiang)血(xue)液先自然存(cun)(cun)放(fang)(fang)(fang)(fang)1-2小時(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)后(hou)，再用3000rmp離(li)心15分鐘；標(biao)(biao)本(ben)(ben)為血(xue)漿：必(bi)須使用含抗(kang)凝劑的血(xue)液標(biao)(biao)本(ben)(ben)收集管，采血(xue)后(hou)必(bi)須立即顛倒采血(xue)管混合(he)5-10次，放(fang)(fang)(fang)(fang)置(zhi)一段時(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)間后(hou)，3000rpm離(li)心15分鐘；若(ruo)在(zai)幾(ji)天內(nei)檢測，可放(fang)(fang)(fang)(fang)在(zai)2-8℃冰箱中，若(ruo)要貯存(cun)(cun)，則置(zhi)于-20℃的低溫冰箱內(nei)。 2） 加(jia)(jia)樣后(hou)及(ji)時(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)放(fang)(fang)(fang)(fang)入孵(fu)箱。 3） 加(jia)(jia)酶(mei)試劑后(hou)用吸(xi)水紙(zhi)在(zai)酶(mei)標(biao)(biao)板(ban)表(biao)面輕(qing)拭(shi)吸(xi)干。 4） 如果采用AT或其他全自動(dong)加(jia)(jia)樣，最好選擇FAME或其他后(hou)處理儀器加(jia)(jia)酶(mei)試劑。 5） 標(biao)(biao)本(ben)(ben)較多時(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)，請分批操作。
3 孵育(yu) 可能(neng)原因： 1） 孵育(yu)時未貼封片或(huo)加蓋，使(shi)標本或(huo)稀釋液蒸發(fa)，吸附于孔壁，難于清洗徹底； 2） 孵育(yu)時間人為延長(chang)，導(dao)致非特異性結合緊附于反(fan)應孔周圍(wei)，難以清洗徹底。解決辦法： 1） 貼封片或(huo)加蓋； 2） 按說明步驟嚴格控制操(cao)作(zuo)時間。
4 洗(xi)(xi)(xi)板 可能(neng)原因： 1） 采用手工洗(xi)(xi)(xi)板,孔(kong)與孔(kong)之間液(ye)體交叉。 2） 采用半(ban)自動洗(xi)(xi)(xi)板機洗(xi)(xi)(xi)板時(shi)(shi)，洗(xi)(xi)(xi)液(ye)量不(bu)足，導(dao)(dao)致洗(xi)(xi)(xi)板不(bu)徹底；洗(xi)(xi)(xi)板針堵塞，抽吸不(bu)完全；洗(xi)(xi)(xi)板不(bu)暢(chang)，導(dao)(dao)致洗(xi)(xi)(xi)板效果差。 3） 反應板過(guo)多造成洗(xi)(xi)(xi)板等待時(shi)(shi)間長。 解決辦法： 1） 保證洗(xi)(xi)(xi)液(ye)注滿各孔(kong)，洗(xi)(xi)(xi)板針暢(chang)通(tong)，洗(xi)(xi)(xi)完板后最好(hao)在吸水紙（選擇干凈、無(wu)或(huo)少塵的吸水材料）上(shang)輕輕拍干； 2） 合理(li)安(an)排(pai)，或(huo)多用幾臺(tai)洗(xi)(xi)(xi)板機。
5 顯色(se)(se)(se)(se) 可(ke)能原(yuan)因(yin)： 1） 顯色(se)(se)(se)(se)劑(ji)(ji)配制(zhi)(zhi)后(hou)放置(zhi)時間過長(chang)或使用過期顯色(se)(se)(se)(se)劑(ji)(ji)； 2） 加(jia)顯色(se)(se)(se)(se)劑(ji)(ji)時濺(jian)出孔外(wai)造成(cheng)液體回流(liu)。解決(jue)辦法： 1） 顯色(se)(se)(se)(se)劑(ji)(ji)盡量在臨用前配制(zhi)(zhi)，堅持(chi)不用過期顯色(se)(se)(se)(se)劑(ji)(ji)，肉眼可(ke)見淺藍色(se)(se)(se)(se)的(de)TMB顯色(se)(se)(se)(se)劑(ji)(ji)不用； 2） 加(jia)樣時保持(chi)顯色(se)(se)(se)(se)劑(ji)(ji)不外(wai)流(liu)； 3） A、B液應避免接(jie)觸金屬器械。
6 終止(zhi) 可能原因(yin)如加(jia)終止(zhi)液時(shi)產生(sheng)較多氣(qi)泡，導致假陽性增加(jia)。所以在加(jia)終止(zhi)液時(shi)應避免產生(sheng)氣(qi)泡。
7 讀板(ban) 如讀板(ban)時(shi)板(ban)底不清(qing)潔等。應保證酶標板(ban)清(qing)潔。
所以在整(zheng)個操作過程中(zhong)保證酶標板不(bu)接觸(chu)次氯酸; 盡可能(neng)實現(xian)ELISA檢測標準自(zi)動(dong)化，有效提(ti)高檢測質量(liang)。
在實際操(cao)作(zuo)中，除了選擇優良(liang)試劑外，必須嚴格按照(zhao)操(cao)作(zuo)步驟進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)，同時作(zuo)好室(shi)內質(zhi)控、室(shi)間質(zhi)評，以嚴謹的工(gong)作(zuo)作(zuo)風檢(jian)(jian)測每一份標(biao)本(ben)，才(cai)能保證檢(jian)(jian)測質(zhi)量。現在國內已(yi)有相(xiang)當(dang)數(shu)量的單位擁有全(quan)自動(dong)酶標(biao)儀，這對(dui)于實現ELISA標(biao)準(zhun)化檢(jian)(jian)測、提(ti)高檢(jian)(jian)測質(zhi)量起到了重要(yao)作(zuo)用(yong)。
本文關鍵詞：ELISA中常見問題及解決方法(fa)
