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黃曲霉毒素B1免疫親和柱操作說明書
【概要】
黃曲(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)霉(mei)(mei)毒(du)(du)(du)素(su)（Aflatoxin）是黃曲(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)霉(mei)(mei)、寄生曲(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)霉(mei)(mei)等(deng)真菌(jun)產生的(de)次級(ji)代謝(xie)產物(wu)(wu)，被世界衛生組織的(de)癌(ai)(ai)癥研(yan)究機構(gou)劃分為1類致(zhi)癌(ai)(ai)物(wu)(wu)，同時(shi)又是一(yi)種毒(du)(du)(du)性極強的(de)劇毒(du)(du)(du)物(wu)(wu)質，廣泛存(cun)在(zai)于各(ge)種食(shi)物(wu)(wu)中。玉米，花生，大(da)(da)米，小麥等(deng)谷物(wu)(wu)及其副產品(pin)(pin)是黃曲(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)霉(mei)(mei)毒(du)(du)(du)素(su)的(de)主要來源，同時(shi)飼(si)料中的(de)黃曲(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)霉(mei)(mei)毒(du)(du)(du)素(su)B1經(jing)過(guo)動物(wu)(wu)代謝(xie)后(hou)產生的(de)黃曲(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)霉(mei)(mei)毒(du)(du)(du)素(su)M1仍然具有很強的(de)毒(du)(du)(du)性和致(zhi)癌(ai)(ai)性，也(ye)廣泛存(cun)在(zai)牛奶(nai)，血液，組織等(deng)食(shi)品(pin)(pin)中。黃曲(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)霉(mei)(mei)毒(du)(du)(du)素(su)作為肝癌(ai)(ai)的(de)三(san)大(da)(da)誘因(yin)之一(yi)，也(ye)是誘發胃(wei)癌(ai)(ai)，腸癌(ai)(ai)等(deng)疾病(bing)的(de)主要原因(yin)之一(yi)，對人(ren)類的(de)健康構(gou)成(cheng)很大(da)(da)威(wei)脅。世界各(ge)國對食(shi)品(pin)(pin)，飼(si)料中的(de)黃曲(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)霉(mei)(mei)毒(du)(du)(du)素(su)都有嚴格的(de)限量標(biao)準。
【適用范圍及性能】
用于(yu)定(ding)性、定(ding)量檢測谷物、副食品(pin)、酒類(lei)等(deng)食品(pin)和飼料等(deng)樣本(ben)中的黃曲霉毒(du)素總量B1時(shi)的樣品(pin)前處(chu)理。
柱容(rong)量：≥200ng
回(hui)收率：≥90%
【試驗原理】
本(ben)產品(pin)的測定的基礎是抗(kang)原抗(kang)體(ti)反應，黃曲霉(mei)毒(du)素B1單克隆抗(kang)體(ti)連接在(zai)柱內凝膠上，樣品(pin)中(zhong)的黃曲霉(mei)毒(du)素B1經(jing)過(guo)提取(qu)、過(guo)濾(lv)、稀釋，然后(hou)將樣品(pin)提取(qu)液緩慢的通過(guo)黃曲霉(mei)毒(du)素B1免(mian)疫親和層析(xi)柱，在(zai)免(mian)疫親和柱內，毒(du)素與(yu)抗(kang)體(ti)結(jie)合，之后(hou)洗(xi)(xi)滌免(mian)疫親和柱除去沒有被結(jie)合的其他物質。用甲醇洗(xi)(xi)脫(tuo)黃曲霉(mei)毒(du)素B1，然后(hou)注(zhu)入到分(fen)析(xi)儀器中(zhong)用于(yu)檢測。
【包裝組成】
根據不同規(gui)格，每一個盒中包含5-25支黃曲霉毒(du)素免疫親和層析柱(zhu)及1份說(shuo)明書。
【需要而未提供的設備及試劑】
設備：
┅┅高速均質(zhi)器或(huo)組(zu)織勻漿機
┅┅粉碎機
┅┅200ml/50ml量筒
┅┅天平：感量0.1g
┅┅微量(liang)移液器：單道(dao) 100?l～1000?l
┅┅槽(cao)紋濾(lv)紙（折疊(die)快(kuai)速定性(xing)或定量濾(lv)紙）
┅┅玻璃微纖維(wei)濾(lv)紙（1.5?m孔(kong)徑）
┅┅50ml漏斗
┅┅一次性玻璃試管
┅┅泵流操作架（包(bao)括空氣(qi)泵，不(bu)同容積的(de)玻璃注射器等）
試劑：
┅┅甲醇（色譜級）
┅┅蒸餾水或(huo)去(qu)離子(zi)水
┅┅pH7.0磷(lin)酸(suan)(suan)鹽緩(huan)沖溶液（PBS）：稱取8.0g氯(lv)化鈉(na)，1.2g磷(lin)酸(suan)(suan)氫二鈉(na)，0.2g磷(lin)酸(suan)(suan)二氫鉀，0.2g氯(lv)化鉀，用990mL純(chun)水溶解，然后用濃鹽酸(suan)(suan)調節pH值至7.0，最后用純(chun)水稀釋至1000mL
┅┅吐(tu)溫-20/PBS溶液（0.1%）：取1mL吐(tu)溫-20，加入PBS緩(huan)沖溶液并定容至1000mL
【試劑配制】
樣(yang)(yang)品(pin)(pin)提取(qu)液：根(gen)據不同(tong)的樣(yang)(yang)品(pin)(pin)配置不同(tong)濃度(du)的甲醇水(shui)溶液，作(zuo)為樣(yang)(yang)品(pin)(pin)提取(qu)液。
【樣本處理步驟】
（一）花生，玉米，大米，小麥及其制品，植物油脂和飼料
┅┅取(qu)(qu)25g粉(fen)碎的樣(yang)品（植物(wu)油脂直(zhi)接(jie)取(qu)(qu)樣(yang)，無需(xu)處理(li)）與125mL甲(jia)醇-水（7：3）溶液混(hun)合；
┅┅加入(ru)5.0g氯化鈉以均(jun)質器(qi)高(gao)速攪拌，提取2分鐘；
┅┅4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過(guo)濾；
┅┅取15mL濾(lv)液并加入30mL水稀(xi)釋，用玻璃微纖維濾(lv)紙(zhi)過濾(lv)，取稀(xi)釋后液體待測；
┅┅將(jiang)免疫親(qin)和柱連接于20.0mL玻璃(li)注(zhu)射器(qi)下。準確移取(qu)15.0mL樣品提取(qu)液注(zhu)入玻璃(li)注(zhu)射器(qi)；
┅┅將空(kong)氣(qi)(qi)壓(ya)力(li)泵與玻璃注射器連接，調(diao)節壓(ya)力(li)使溶(rong)液以約6mL/min流(liu)速緩慢通過(guo)免(mian)疫(yi)親和柱，直至2~3mL空(kong)氣(qi)(qi)通過(guo)柱體；
┅┅以10.0mL水淋洗柱(zhu)(zhu)子2次，棄去全部流(liu)出液，并使2mL~3mL空氣通過(guo)柱(zhu)(zhu)體；
┅┅準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫，流(liu)速(su)為1 mL/min ~2mL/min，收集全(quan)部洗脫液于玻璃試管中，供檢(jian)測(ce)用。
（二）醬油
┅┅取50g試樣與100mL甲醇(chun)-水（8：2）溶液(ye)混合；
┅┅加入2.5g氯化鈉以均質器(qi)高速攪(jiao)拌(ban)，提取1分鐘；
┅┅4000r/min離(li)心(xin)5min或用槽紋濾紙過濾；
┅┅取10mL濾(lv)液(ye)并加入(ru)40mL水稀釋，用玻璃微纖(xian)維濾(lv)紙(zhi)過(guo)濾(lv)
┅┅取稀釋后液(ye)體待測；
┅┅將免疫親(qin)和柱(zhu)連接于10.0mL玻(bo)璃(li)(li)注(zhu)射(she)器(qi)下。準確移(yi)取10.0mL樣品提取液(ye)注(zhu)入玻(bo)璃(li)(li)注(zhu)射(she)器(qi)；
┅┅將空氣壓(ya)(ya)力泵(beng)與玻璃(li)注射器(qi)連(lian)接，調節壓(ya)(ya)力使(shi)溶液(ye)以約6mL/min流速(su)緩慢通過免疫親(qin)和柱，直至2~3mL空氣通過柱體(ti)；
┅┅用10.0mL 0.1%的吐溫/PBS清洗，再以(yi)10.0mL水淋洗柱子(zi)2次，棄去全(quan)部流出液，并使2mL~3mL空氣(qi)通過(guo)柱體；
┅┅準確加入1.0mL色(se)譜(pu)級(ji)甲(jia)醇洗(xi)脫，流速為(wei)1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗(xi)脫液于玻(bo)璃試管中(zhong)，供檢(jian)測用。
（三）食醋
┅┅取5g試樣，加入1.0g氯化鈉(na)；
┅┅以pH7.0磷酸鹽緩沖溶液(ye)稀釋定容至25.0mL；
┅┅4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過濾；
┅┅取10mL濾(lv)液并加入10mL水稀釋，用玻(bo)璃微(wei)纖維濾(lv)紙過濾(lv)
┅┅取稀釋(shi)后液(ye)體待測。
┅┅將免(mian)疫親和柱連接(jie)于10.0mL玻(bo)璃(li)注射(she)器(qi)下(xia)。準(zhun)確移取(qu)10.0mL樣品提(ti)取(qu)液注入(ru)玻(bo)璃(li)注射(she)器(qi)；
┅┅將空氣壓(ya)力(li)(li)泵與(yu)玻璃(li)注(zhu)射(she)器連接，調節(jie)壓(ya)力(li)(li)使溶(rong)液(ye)以約6mL/min流速緩(huan)慢通過免疫親(qin)和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；
┅┅用(yong)10.0mL 0.1%的吐溫/PBS清洗，再以10.0mL水淋洗柱子2次，棄(qi)去全部流(liu)出液(ye)，并使2mL~3mL空氣通過柱體；
┅┅準確加入1.0mL色譜級甲(jia)醇洗脫(tuo)，流(liu)速為1 mL/min ~2mL/min，收集全(quan)部洗脫(tuo)液于玻璃試管(guan)中，供檢測用。
【結果判定】
經(jing)免疫親和柱凈(jing)化后，收(shou)集到的(de)甲醇(chun)洗脫(tuo)液可直接(jie)使用(yong)熒(ying)光計(ji)或者HPLC檢測，也(ye)可使用(yong)薄層(ceng)色(se)譜或者酶聯免疫試(shi)劑盒(he)進行檢測。收(shou)集到的(de)1mL洗脫(tuo)液中(zhong)的(de)黃(huang)曲(qu)霉(mei)毒素B1含(han)量(liang)相當(dang)于1g樣品中(zhong)黃(huang)曲(qu)霉(mei)毒素B1含(han)量(liang)。
【高效液相參考譜圖】
【注意事項】
┅┅黃曲霉毒素危害極大，應戴手套(tao)操作。
┅┅使(shi)用(yong)過的玻(bo)璃容器及黃曲霉毒素溶液最好用(yong)5%濃度次氯酸鈉(na)溶液浸泡過夜。
┅┅不要使用過(guo)了有(you)效日期(qi)的免(mian)疫親和柱(zhu)。
【貯藏條件及保存期】
貯藏條件：親和柱可(ke)于常(chang)溫保存(cun)，2-8℃儲存(cun)可(ke)延長(chang)有效(xiao)期(qi)，不可(ke)凍存(cun)
保存期(qi)：該產品有效期(qi)為12個月。
