玉米赤霉烯酮免疫親和柱操作說明書
【概要】
玉米赤霉(mei)烯酮(Zearaleaone)又稱F-2毒素，是玉米赤霉(mei)菌(jun)的(de)代謝產物，具有(you)(you)類雌(ci)激(ji)素樣作用，具有(you)(you)較強的(de)生(sheng)殖毒性和(he)致畸作用，可引起動(dong)物發生(sheng)雌(ci)激(ji)素亢進癥，導致動(dong)物不(bu)孕或(huo)流產，對(dui)家禽、豬、牛和(he)羊(yang)的(de)影響較大，給畜牧(mu)業(ye)帶(dai)來很大的(de)經濟損失。
【適用范圍及性能】
用于定性、定量檢測谷物、酒(jiu)類等食(shi)品(pin)和飼料等樣(yang)本中的玉米赤霉(mei)烯酮時的樣(yang)品(pin)前處理。
柱容(rong)量(liang)：≥200ng
回收率(lv)：≥90%
【試驗原理】
本產品的(de)(de)測定的(de)(de)基礎是抗(kang)(kang)原抗(kang)(kang)體反(fan)應，玉米(mi)赤霉(mei)(mei)烯(xi)酮(tong)(tong)單(dan)克隆抗(kang)(kang)體連接在柱(zhu)內凝(ning)膠(jiao)上(shang)，樣品中的(de)(de)玉米(mi)赤霉(mei)(mei)烯(xi)酮(tong)(tong)經過(guo)提取、過(guo)濾、稀(xi)釋(shi)，然(ran)后將樣品提取液緩(huan)慢的(de)(de)通過(guo)玉米(mi)赤霉(mei)(mei)烯(xi)酮(tong)(tong)免(mian)疫(yi)(yi)親(qin)(qin)和(he)(he)層析柱(zhu)，在免(mian)疫(yi)(yi)親(qin)(qin)和(he)(he)柱(zhu)內，玉米(mi)赤霉(mei)(mei)烯(xi)酮(tong)(tong)與抗(kang)(kang)體結(jie)合，之(zhi)后洗滌免(mian)疫(yi)(yi)親(qin)(qin)和(he)(he)柱(zhu)除去沒有被結(jie)合的(de)(de)其他物(wu)質(zhi)。用甲(jia)醇洗脫玉米(mi)赤霉(mei)(mei)烯(xi)酮(tong)(tong)，然(ran)后注(zhu)入到(dao)分析儀器中用于檢(jian)測。
【包裝組成】
根據不同規(gui)格(ge)，每一個盒中包含(han)5-25支玉米(mi)赤霉烯酮免疫親和(he)層析柱(zhu)及1份說(shuo)明書。
【需要而未提供的設備及試劑】
設備：
┅┅高速(su)均(jun)質器(qi)或組織勻漿機
┅┅粉(fen)碎機
┅┅200ml/50ml量筒
┅┅天(tian)平：感量0.1g
┅┅微(wei)量移液器(qi)：單道 100?l～1000?l
┅┅槽紋濾紙（折(zhe)疊(die)快速定(ding)性(xing)或(huo)定(ding)量濾紙）
┅┅玻璃微纖維濾紙(zhi)（1.5?m孔(kong)徑）
┅┅50ml漏斗
┅┅一次性玻璃(li)試管(guan)
┅┅泵流操(cao)作架（包括(kuo)空(kong)氣(qi)泵，不(bu)同容積的玻璃注(zhu)射器(qi)等）
試劑：
┅┅甲醇（色譜(pu)級）
┅┅蒸餾(liu)水或(huo)去離子水
┅┅pH7.0磷(lin)酸(suan)鹽緩沖(chong)溶(rong)液（PBS緩沖(chong)液）：稱取8.0g氯化鈉，1.2g磷(lin)酸(suan)氫(qing)二鈉，0.2g磷(lin)酸(suan)二氫(qing)鉀(jia)(jia)，0.2g氯化鉀(jia)(jia)，用990mL純水溶(rong)解，然后用濃鹽酸(suan)調(diao)節pH值至7.0，最后用純水稀釋至1000mL
【試劑配制】
樣(yang)品(pin)提取液(ye)：配制甲(jia)醇-水（8：2）溶液(ye)作為(wei)樣(yang)品(pin)提取液(ye)
【樣本處理步驟】
（一）花生，玉米，大米，小麥及其制品和飼料
┅┅稱取50g粉碎的樣品(pin)于(yu)100mL容(rong)量(liang)瓶中，加入5.0g氯化鈉(na)，以樣品(pin)提取液定容(rong)。
┅┅轉移至均質(zhi)(zhi)杯中，在均質(zhi)(zhi)器上(shang)高速攪(jiao)拌，提取2分鐘；
┅┅4000r/min離心5min或用(yong)定量濾(lv)紙過濾(lv)
┅┅取10mL濾液(ye)并加入40mLPBS緩沖液(ye)稀釋，用玻(bo)璃(li)微(wei)纖維濾紙過濾，取過濾后液(ye)體待(dai)測；
┅┅將(jiang)免疫親(qin)和(he)柱連接于10.0mL玻璃注射(she)器(qi)下。準確(que)移(yi)取(qu)10.0mL樣品提取(qu)液(ye)注入玻璃注射(she)器(qi)；
┅┅將空(kong)氣壓(ya)力泵與玻璃注射器連(lian)接，調節壓(ya)力使(shi)溶液以(yi)約1滴/S的流(liu)速緩慢通過免疫親和柱(zhu)，直至(zhi)2~3mL空(kong)氣通過柱(zhu)體；
┅┅以10.0mL的PBS溶液和(he)去離(li)子水依次淋洗(xi)柱(zhu)子1次，流(liu)速(su)約為1滴-2滴/S，棄(qi)去全(quan)部流(liu)出液，并(bing)使2mL~3mL空氣通過柱(zhu)體；
┅┅準(zhun)確加入1.0mL色譜級甲(jia)醇洗脫，流速為(wei)1 滴/S，收集全部洗脫液于玻璃(li)試管(guan)中，供檢測用。
（二）啤酒，黃酒等酒類
┅┅取(qu)(qu)10mL試樣脫氣后與(yu)90mLPBS緩(huan)沖(chong)液混勻，用(yong)玻璃(li)微(wei)纖維濾(lv)(lv)紙過(guo)濾(lv)(lv)，取(qu)(qu)過(guo)濾(lv)(lv)后液體待測；
┅┅將(jiang)免疫親和(he)柱連接于10.0mL玻璃注射(she)器(qi)(qi)下(xia)。準(zhun)確移取10.0mL樣品(pin)提取液(ye)注入玻璃注射(she)器(qi)(qi)；
┅┅將(jiang)空氣壓(ya)(ya)力(li)泵與(yu)玻(bo)璃(li)注(zhu)射器連接，調節壓(ya)(ya)力(li)使溶液(ye)以約1滴/S的(de)流速(su)緩慢(man)通(tong)過免(mian)疫親和柱(zhu)(zhu)，直至2~3mL空氣通(tong)過柱(zhu)(zhu)體；
┅┅以10.0mL的PBS溶液和去(qu)離子水依次(ci)淋洗柱子1次(ci)，流速約為1滴-2滴/S，棄去(qu)全(quan)部流出液，并使2mL~3mL空氣通(tong)過柱體；
┅┅準確加(jia)入1.0mL色(se)譜級(ji)甲醇洗脫(tuo)，流(liu)速為1 滴/S，收(shou)集全部洗脫(tuo)液于玻璃試管中，供(gong)檢測(ce)用(yong)。
【結果判定】
經(jing)免疫親和柱凈化后(hou)，收集(ji)到的甲醇洗脫(tuo)(tuo)液(ye)可直接使(shi)用(yong)熒光計或者(zhe)HPLC檢測，也可使(shi)用(yong)薄層色譜或者(zhe)酶聯免疫試劑盒進行檢測。收集(ji)到的1ml洗脫(tuo)(tuo)液(ye)中的玉米赤霉烯(xi)酮含量相(xiang)當于(yu)1g樣品(pin)中玉米赤霉烯(xi)酮含量。
【注意事項】
┅┅玉(yu)米赤霉烯酮危害(hai)很大(da)，應戴手套操作(zuo)。
┅┅不要使用過了有效日期的免疫親和(he)柱。
【貯藏條件及保存期】
貯(zhu)藏條件(jian)：親和柱(zhu)可于常溫保存(cun)，2-8℃儲(chu)存(cun)可延長有效期，不可凍(dong)存(cun)
保存期：該(gai)產品(pin)有效期為(wei)12個月。
