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赭曲霉毒素A免疫親和柱操作說明書
【概要】
赭曲(qu)霉(mei)(mei)毒(du)(du)素A （Ochratoxin A）是曲(qu)霉(mei)(mei)屬(shu)和(he)青霉(mei)(mei)屬(shu)的真菌形成的次級代謝產(chan)(chan)物，屬(shu)烈(lie)性(xing)的腎臟毒(du)(du)和(he)肝臟毒(du)(du)，廣泛存在于各種食物中，谷物及(ji)其(qi)副(fu)產(chan)(chan)品(pin)是赭曲(qu)霉(mei)(mei)毒(du)(du)素A的主要來源。動(dong)物實(shi)驗表明(ming)攝(she)入了被這(zhe)種毒(du)(du)素污(wu)染的飼(si)料后，會發(fa)生急性(xing)或慢(man)性(xing)中毒(du)(du)癥。防止污(wu)染赭曲(qu)霉(mei)(mei)毒(du)(du)素A的食品(pin)和(he)飼(si)料直接(jie)或間接(jie)地(di)進(jin)入人(ren)類食物鏈，加強對赭曲(qu)霉(mei)(mei)毒(du)(du)素A的檢測十(shi)分重要。
【適用范圍及性能】
用于定性、定量檢測谷(gu)物(wu)、酒類等(deng)食品(pin)(pin)和飼料等(deng)樣本中(zhong)的赭(zhe)曲霉毒素A時的樣品(pin)(pin)前處理(li)。
柱(zhu)容量(liang)：≥200ng
回收率：≥90%
【試驗原理】
本(ben)產品(pin)(pin)的(de)測定的(de)基礎是抗(kang)原抗(kang)體反應(ying)，赭(zhe)(zhe)曲霉(mei)(mei)毒(du)素(su)A單克隆抗(kang)體連接(jie)在柱內(nei)凝膠上，樣品(pin)(pin)中的(de)赭(zhe)(zhe)曲霉(mei)(mei)毒(du)素(su)A經(jing)過(guo)提取、過(guo)濾、稀(xi)釋，然后(hou)(hou)將(jiang)樣品(pin)(pin)提取液緩慢的(de)通過(guo)赭(zhe)(zhe)曲霉(mei)(mei)毒(du)素(su)A免疫(yi)親和層(ceng)析柱，在免疫(yi)親和柱內(nei)，赭(zhe)(zhe)曲霉(mei)(mei)毒(du)素(su)A與抗(kang)體結(jie)合，之后(hou)(hou)洗滌(di)免疫(yi)親和柱除(chu)去沒(mei)有被結(jie)合的(de)其他物質。用(yong)(yong)甲醇洗脫赭(zhe)(zhe)曲霉(mei)(mei)毒(du)素(su)A，然后(hou)(hou)注入到分析儀器(qi)中用(yong)(yong)于檢測。
【包裝組成】
根據不同(tong)規格，每一個盒(he)中包含5-25支赭曲霉毒素A免疫親和(he)層析柱(zhu)及1份說明書。
【需要而未提供的設備及試劑】
設備：
┅┅高(gao)速均質器或組織勻漿(jiang)機
┅┅粉碎機
┅┅200ml/50ml量筒
┅┅天平：感量(liang)0.1g
┅┅微量移液器(qi)：單道(dao) 100?l～1000?l
┅┅槽紋濾紙(zhi)（折疊快速定性或(huo)定量濾紙(zhi)）
┅┅玻(bo)璃微纖維濾紙(zhi)（1.5?m孔徑(jing)）
┅┅50ml漏斗
┅┅一次(ci)性玻璃試(shi)管
┅┅泵流操作架（包括空氣泵，不(bu)同容積(ji)的玻璃注射(she)器等(deng)）
試劑：
┅┅甲醇（色譜級(ji)）
┅┅蒸餾水或(huo)去離子水
┅┅pH7.0磷酸(suan)鹽(yan)緩沖溶(rong)液（PBS緩沖液）：稱取8.0g氯(lv)化鈉，1.2g磷酸(suan)氫二鈉，0.2g磷酸(suan)二氫鉀(jia)，0.2g氯(lv)化鉀(jia)，用(yong)990mL純水(shui)溶(rong)解，然后用(yong)濃鹽(yan)酸(suan)調節pH值至7.0，最后用(yong)純水(shui)稀釋至1000mL
┅┅清洗緩(huan)沖液：25g 氯化鈉+5g碳(tan)酸氫鈉+0.1mL吐溫-20
用(yong)純水(shui)稀釋至1000 mL
【試劑配制】
樣品提取(qu)液(ye)：配制(zhi)甲醇-水（8：2）溶液(ye)作為(wei)樣品提取(qu)液(ye)
【樣本處理步驟】
（一）花生，玉米，大米，小麥及其制品和飼料
┅┅稱取20g粉(fen)碎(sui)的樣(yang)品(pin)于100mL容量瓶(ping)中，加入5.0g氯化鈉，以(yi)甲醇-水（8：2）溶液(ye)定容；
┅┅轉移(yi)到均(jun)質杯中，以均(jun)質器高速攪拌，提取2分鐘；
┅┅4000r/min離心5min或(huo)用定量濾紙過濾；
┅┅取(qu)10mL濾液(ye)(ye)并加入40mLPBS緩沖液(ye)(ye)稀釋，用玻璃微(wei)纖(xian)維濾紙(zhi)過濾，取(qu)過濾后液(ye)(ye)體待測；
┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃(li)注射(she)器(qi)下。準(zhun)確移取10.0mL樣(yang)品(pin)提(ti)取液(ye)注入玻璃(li)注射(she)器(qi)；
┅┅將空(kong)氣壓力泵與(yu)玻璃(li)注(zhu)射器連(lian)接，調節(jie)壓力使溶液以約1滴(di)/S流(liu)速緩慢通過免疫(yi)親和柱，直(zhi)至2~3mL空(kong)氣通過柱體；
┅┅以10.0mL清洗緩沖(chong)液淋洗柱子1次，流(liu)速為1滴(di)-2滴(di)/S，棄去全部流(liu)出液，
┅┅再(zai)以(yi)10.0mL水(shui)淋洗柱子1次(ci)，流速為1滴-2滴/S，棄去全部流出液，并使(shi)2mL~3mL空氣通(tong)過(guo)柱體(ti)；
┅┅準確(que)加入(ru)1.0mL色譜級甲醇洗脫，流速為1 滴/S，收集全部(bu)洗脫液于玻(bo)璃試管中，供檢測用。
（二）啤酒，黃酒等酒類
┅┅取10mL試樣脫氣后(hou)與90mLPBS緩沖液(ye)混勻，用玻璃微纖維濾(lv)紙過濾(lv)，取過濾(lv)后(hou)液(ye)體待測；
┅┅將免疫親和柱連(lian)接于10.0mL玻璃(li)注射(she)器下。準確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃(li)注射(she)器；
┅┅將空氣(qi)壓力泵與玻璃(li)注射(she)器連接，調節壓力使溶液以約1滴(di)/S流速緩(huan)慢通(tong)過(guo)免疫親和柱(zhu)，直至2~3mL空氣(qi)通(tong)過(guo)柱(zhu)體；
┅┅以10.0mL清洗緩沖液(ye)(ye)淋洗柱子1次，流速為1滴-2滴/S，棄去全部流出液(ye)(ye)，
┅┅再以10.0mL水淋(lin)洗柱子1次(ci)，流(liu)速為1滴-2滴/S，棄(qi)去全部流(liu)出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體；
┅┅準確加入1.0mL色譜(pu)級甲醇洗脫，流速(su)為1 滴/S，收集全
部洗脫液于玻(bo)璃試管中，供檢測用。
【結果判定】
經免疫親和(he)柱凈化(hua)后(hou)，收(shou)集(ji)到的(de)甲(jia)醇洗脫(tuo)液可直接(jie)使用(yong)(yong)熒光計或者HPLC檢測，也可使用(yong)(yong)薄層色譜或者酶聯(lian)免疫試(shi)劑盒進行(xing)檢測。收(shou)集(ji)到的(de)1ml洗脫(tuo)液中的(de)赭曲霉毒(du)素A含量(liang)(liang)相當于1g樣品中赭曲霉毒(du)素A含量(liang)(liang)。
【注意事項】
┅┅赭曲霉毒(du)素危害(hai)極大，應戴手(shou)套(tao)操作。
┅┅不(bu)要使(shi)用過(guo)了(le)有效日期的免疫親和(he)柱。
【貯藏條件及保存期】
貯藏條件：親(qin)和柱可(ke)于常溫保存(cun)，2-8℃儲存(cun)可(ke)延長有效期，不(bu)可(ke)凍存(cun)
保存期：該產品有效期為(wei)12個月(yue)。
