嘔吐毒素免疫親和柱操作說明書
【概要】
脫(tuo)氧雪腐(fu)鐮刀(dao)菌烯(xi)醇(chun)(deoxynivalenol， DON) 又稱嘔(ou)吐(tu)毒素(su)(vomitoxin)，主(zhu)要是由鐮刀(dao)菌的某些(xie)種(zhong)產生的化學結構和生物活性相似(si)的有(you)毒代謝產物——單端(duan)孢霉烯(xi)族化合物中的一(yi)種(zhong)。廣泛存在于全球(qiu)，主(zhu)要污(wu)染(ran)小麥(mai)、大麥(mai)、玉米等(deng)谷(gu)類作物，也污(wu)染(ran)糧(liang)食制品，人和動物在誤食被該(gai)毒素(su)污(wu)染(ran)的糧(liang)谷(gu)類后(hou)可(ke)以(yi)產生廣泛的毒性效應。DON最明顯的毒性作用是引(yin)起(qi)嘔(ou)吐(tu)、腹瀉、腹痛等(deng)癥(zheng)，并延緩生長(chang)、降低免疫機能，與貧(pin)血、免疫抑制、食管癌、克(ke)山(shan)病也具有(you)密切聯系。給人、家畜(chu)的健(jian)康(kang)造成巨大威(wei)脅。
【適用范圍及性能】
用于定性、定量檢測谷物(wu)、酒類等(deng)食品(pin)和飼料等(deng)樣本中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇時(shi)的樣品(pin)前(qian)處理(li)。
柱容(rong)量：≥500ng
回收率：≥80%
【試驗原理】
本產品(pin)的(de)(de)測(ce)定的(de)(de)基礎(chu)是(shi)抗原抗體反應，脫(tuo)(tuo)氧(yang)雪腐(fu)(fu)鐮刀菌(jun)烯(xi)醇(chun)(chun)(chun)單克隆抗體連接在柱(zhu)內(nei)凝膠(jiao)上，樣(yang)品(pin)中的(de)(de)脫(tuo)(tuo)氧(yang)雪腐(fu)(fu)鐮刀菌(jun)烯(xi)醇(chun)(chun)(chun)經過(guo)提取、過(guo)濾、稀釋(shi)，然后將樣(yang)品(pin)提取液緩慢的(de)(de)通過(guo)脫(tuo)(tuo)氧(yang)雪腐(fu)(fu)鐮刀菌(jun)烯(xi)醇(chun)(chun)(chun)免(mian)疫(yi)親(qin)和層析(xi)(xi)柱(zhu)，在免(mian)疫(yi)親(qin)和柱(zhu)內(nei)，脫(tuo)(tuo)氧(yang)雪腐(fu)(fu)鐮刀菌(jun)烯(xi)醇(chun)(chun)(chun)與抗體結(jie)合，之后洗滌免(mian)疫(yi)親(qin)和柱(zhu)除(chu)去沒有被結(jie)合的(de)(de)其他(ta)物質。用(yong)甲醇(chun)(chun)(chun)洗脫(tuo)(tuo)脫(tuo)(tuo)氧(yang)雪腐(fu)(fu)鐮刀菌(jun)烯(xi)醇(chun)(chun)(chun)，然后注入到分(fen)析(xi)(xi)儀器中用(yong)于檢測(ce)。
【包裝組成】
根據不同(tong)規格(ge)，每一個(ge)盒(he)中(zhong)包含5/25支脫氧雪腐(fu)鐮刀菌烯醇免(mian)疫親和層析柱(zhu)及1份說明書(shu)。
【需要而未提供的設備及試劑】
設備：
┅┅高速均質器(qi)或(huo)組織(zhi)勻漿機
┅┅粉(fen)碎機(ji)
┅┅200ml/50ml量(liang)筒
┅┅天(tian)平：感量0.1g
┅┅微量移液器(qi)：單(dan)道 100μl～1000μl
┅┅槽紋(wen)濾紙(zhi)(zhi)（折(zhe)疊快速定(ding)性(xing)或定(ding)量(liang)濾紙(zhi)(zhi)）
┅┅玻璃微纖維濾紙(zhi)（1.5μm孔徑）
┅┅50ml漏斗
┅┅一次性玻璃(li)試(shi)管
┅┅泵流操作(zuo)架（包括空(kong)氣泵，不同容積的玻璃注射(she)器等(deng)）
試劑：
┅┅蒸(zheng)餾水或去離子(zi)水
┅┅聚乙(yi)二醇（PEG）2000
┅┅色譜(pu)級甲醇
┅┅pH7.0磷(lin)酸鹽緩沖(chong)溶液（PBS）：稱取8.0g氯化鈉(na)，1.2g磷(lin)酸氫二鈉(na)，0.2g磷(lin)酸二氫鉀，0.2g氯化鉀，用(yong)(yong)990mL純水(shui)溶解，然后用(yong)(yong)濃(nong)鹽酸調節pH值至7.0，最后用(yong)(yong)純水(shui)稀釋至1000mL
【樣本處理步驟】
（一）花生，玉米(mi)，大米(mi)，小麥(mai)及其制品和飼料（稀釋倍數4）
┅┅稱取25g粉碎的(de)樣品(pin)，加入10g聚乙(yi)二(er)醇8000后，用去離子水定容；
┅┅轉移至均質杯中，均質器高(gao)速(su)均質2分(fen)鐘；
┅┅4000r/min離心5min或(huo)用(yong)定量濾紙(zhi)過濾，取(qu)上清液，使用(yong)玻璃(li)纖維濾紙(zhi)過濾后待用(yong)；
┅┅將免疫親和(he)柱連接于10.0mL玻璃注射器(qi)下。準確移取(qu)2mL上述樣品提(ti)取(qu)液注入(ru)玻璃注射器(qi)；
┅┅將空(kong)氣壓力(li)泵與玻璃注射器連接(jie)，調節壓力(li)使溶液以(yi)約1滴(di)/s流(liu)速緩慢通(tong)過免疫(yi)親(qin)和柱，直(zhi)至2~3mL空(kong)氣通(tong)過柱體(ti)；
┅┅以5.0mLPBS溶液(ye)和去(qu)離子水快(kuai)速(su)淋洗柱(zhu)子1次(ci)，流速(su)為2-3滴/秒。棄去(qu)全部流出液(ye)，并使2mL~3mL空(kong)氣通過柱(zhu)體；
┅┅準確加入(ru)1.0mL色譜級甲醇(chun)洗脫，流速為1 滴/S，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用。
（二）酒類（稀釋倍數0.5）
┅┅取脫氣(qi)酒(jiu)(jiu)類(lei)試(shi)樣(yang)(含二(er)氧(yang)化碳(tan)的酒(jiu)(jiu)類(lei)樣(yang)品使用(yong)前先置于4℃冰箱冷(leng)藏(zang)30min，過濾(lv)或(huo)超聲脫氣(qi))或(huo)其(qi)他(ta)不(bu)含二(er)氧(yang)化碳(tan)的
酒類試樣20g(精確到0.01g)，加(jia)人1g聚乙二醇(4.3)，用水(shui)定容至25.0mL，混(hun)勻(yun)。
┅┅用玻璃纖維濾紙過濾至濾液澄(cheng)清(qing)
┅┅將免疫(yi)親和柱連(lian)接于10.0mL玻(bo)璃注射器下。準確移(yi)取2mL上述(shu)樣品(pin)提取液注入(ru)玻(bo)璃注射器；
┅┅將(jiang)空氣壓力泵與(yu)玻(bo)璃注射器連(lian)接，調節壓力使溶液以約1滴/s流速(su)緩慢通過免疫親和柱，直(zhi)至2~3mL空氣通過柱體(ti)；
┅┅以(yi)5.0mLPBS溶(rong)液和(he)去(qu)離(li)子水(shui)快(kuai)速(su)淋洗柱(zhu)子1次(ci)，流速(su)為2-3滴/秒。棄去(qu)全部流出液，并(bing)使2mL~3mL空氣(qi)通過(guo)柱(zhu)體；
┅┅準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫，流速為1 滴/S，收集全(quan)部(bu)洗脫液于玻璃試管中(zhong)，供(gong)檢測用。
【結果判定】
經免疫親和柱(zhu)凈(jing)化后，收集到的甲醇(chun)洗脫液可(ke)直接使(shi)用(yong)熒光計或(huo)者(zhe)HPLC檢(jian)測(ce)，也可(ke)使(shi)用(yong)薄層色譜或(huo)者(zhe)酶聯(lian)免疫試劑盒進行檢(jian)測(ce)。也可(ke)氮氣吹干后，復溶以提(ti)升濃度（稀釋倍數相(xiang)應變化）。
【注意事項】
┅┅嘔吐(tu)毒(du)素危害很(hen)大(da)，應戴(dai)手(shou)套操作。
┅┅不要使用過了有效日(ri)期(qi)的免疫親和(he)柱。
【貯藏條件及保存期】
貯(zhu)藏條件：親和柱(zhu)可(ke)于(yu)常溫保存，2-8℃儲(chu)存可(ke)延長有效期，不可(ke)凍存
保存期：該產品有效期為12個月。
