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黃曲霉毒素總量免疫親和柱操作說明書
【概要】
黃(huang)曲(qu)(qu)霉(mei)毒(du)素(su)（Aflatoxin）是(shi)(shi)黃(huang)曲(qu)(qu)霉(mei)、寄(ji)生曲(qu)(qu)霉(mei)等(deng)(deng)真菌產(chan)生的(de)(de)(de)次級代謝(xie)產(chan)物(wu)(wu)，被世界衛(wei)生組(zu)織(zhi)的(de)(de)(de)癌(ai)(ai)癥研究機(ji)構劃分為1類(lei)致(zhi)癌(ai)(ai)物(wu)(wu)，同(tong)時又是(shi)(shi)一(yi)(yi)種毒(du)性(xing)(xing)極強的(de)(de)(de)劇毒(du)物(wu)(wu)質(zhi)，廣(guang)泛(fan)存在于各種食(shi)物(wu)(wu)中(zhong)(zhong)。玉米，花生，大(da)米，小(xiao)麥(mai)等(deng)(deng)谷物(wu)(wu)及(ji)其(qi)副產(chan)品(pin)是(shi)(shi)黃(huang)曲(qu)(qu)霉(mei)毒(du)素(su)的(de)(de)(de)主要來源，同(tong)時飼(si)料中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)黃(huang)曲(qu)(qu)霉(mei)毒(du)素(su)B1經過動物(wu)(wu)代謝(xie)后(hou)產(chan)生的(de)(de)(de)黃(huang)曲(qu)(qu)霉(mei)毒(du)素(su)M1仍然具(ju)有(you)很(hen)強的(de)(de)(de)毒(du)性(xing)(xing)和致(zhi)癌(ai)(ai)性(xing)(xing)，也廣(guang)泛(fan)存在牛奶，血液，組(zu)織(zhi)等(deng)(deng)食(shi)品(pin)中(zhong)(zhong)。黃(huang)曲(qu)(qu)霉(mei)毒(du)素(su)作(zuo)為肝癌(ai)(ai)的(de)(de)(de)三(san)大(da)誘(you)因之一(yi)(yi)，也是(shi)(shi)誘(you)發胃癌(ai)(ai)，腸癌(ai)(ai)等(deng)(deng)疾病的(de)(de)(de)主要原因之一(yi)(yi)，對人(ren)類(lei)的(de)(de)(de)健康構成很(hen)大(da)威脅。世界各國對食(shi)品(pin)，飼(si)料中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)黃(huang)曲(qu)(qu)霉(mei)毒(du)素(su)都有(you)嚴格的(de)(de)(de)限(xian)量標準(zhun)。
【適用范圍及性能】
用于(yu)定性、定量檢測(ce)谷物、副食(shi)品(pin)(pin)、酒類等(deng)食(shi)品(pin)(pin)和飼料等(deng)樣本中的(de)黃(huang)曲霉毒素總量（B1,B2,G1,G2）時(shi)的(de)樣品(pin)(pin)前處(chu)理。
柱容量：≥200ng
回收率(lv)：≥85%
【試驗原理】
本產品(pin)的(de)測定的(de)基礎是(shi)抗(kang)原抗(kang)體反應，黃(huang)曲霉(mei)(mei)毒素(su)(su)單克隆抗(kang)體連接在(zai)柱內(nei)凝膠上，樣(yang)品(pin)中的(de)黃(huang)曲霉(mei)(mei)毒素(su)(su)經過(guo)提(ti)(ti)取(qu)、過(guo)濾、稀釋，然后將樣(yang)品(pin)提(ti)(ti)取(qu)液緩慢(man)的(de)通過(guo)黃(huang)曲霉(mei)(mei)毒素(su)(su)免疫親和(he)層析柱，在(zai)免疫親和(he)柱內(nei)，毒素(su)(su)與(yu)抗(kang)體結合(he)，之后洗滌免疫親和(he)柱除去沒有被結合(he)的(de)其他物質。用(yong)甲醇洗脫(tuo)黃(huang)曲霉(mei)(mei)毒素(su)(su)，然后注入(ru)到分析儀器中用(yong)于(yu)檢測。
【包裝組成】
根據不同規(gui)格，每一個盒中包含5-25支黃曲霉毒(du)素免疫親和層析柱(zhu)及1份說明書。
【需要而未提供的設備及試劑】
設備：
┅┅高速均(jun)質器或組織勻漿機
┅┅粉碎機
┅┅200ml/50ml量(liang)筒
┅┅天平：感量0.1g
┅┅微量移(yi)液器：單道 100?l～1000?l
┅┅槽紋濾紙（折疊快速定性或定量(liang)濾紙）
┅┅玻璃微(wei)纖(xian)維(wei)濾紙（1.5?m孔徑）
┅┅50ml漏斗
┅┅一次性玻璃(li)試管(guan)
┅┅泵流操作架（包括空氣泵，不同(tong)容積的玻璃注射器(qi)等）
試劑：
┅┅甲醇（色譜級）
┅┅蒸(zheng)餾(liu)水(shui)或去(qu)離子水(shui)
┅┅pH7.0磷酸(suan)(suan)鹽緩沖溶液（PBS）：稱(cheng)取8.0g氯化鈉，1.2g磷酸(suan)(suan)氫(qing)二(er)鈉，0.2g磷酸(suan)(suan)二(er)氫(qing)鉀，0.2g氯化鉀，用(yong)990mL純(chun)水(shui)溶解，然(ran)后用(yong)濃鹽酸(suan)(suan)調節pH值(zhi)至(zhi)7.0，最后用(yong)純(chun)水(shui)稀(xi)釋至(zhi)1000mL
┅┅吐溫-20/PBS溶(rong)液(ye)（0.1%）：取1mL吐溫-20，加入PBS緩沖(chong)溶(rong)液(ye)并定容(rong)至1000mL
【試劑配制】
樣(yang)品提(ti)取(qu)液(ye)(ye)：根據不同(tong)的(de)樣(yang)品配(pei)置(zhi)不同(tong)濃度的(de)甲醇水溶液(ye)(ye)，作為樣(yang)品提(ti)取(qu)液(ye)(ye)。
【樣本處理步驟】
（一）花生，玉米，大米，小麥及其制品，植物油脂和飼料
┅┅取25g粉(fen)碎(sui)的樣(yang)品（植(zhi)物油脂直接取樣(yang)，無需處理）與125mL甲醇-水（7：3）溶(rong)液混合(he)；
┅┅加(jia)入5.0g氯化(hua)鈉以均質器高速攪拌，提取2分鐘(zhong)；
┅┅4000r/min離心(xin)5min或用槽紋濾紙過濾；
┅┅取15mL濾液并加入30mL水稀釋，用(yong)玻(bo)璃微纖(xian)維濾紙過濾
┅┅取稀釋后液體待測；
┅┅將(jiang)免疫親和柱連(lian)接(jie)于20.0mL玻璃(li)注(zhu)射器下。準(zhun)確(que)移(yi)取(qu)15.0mL樣品提(ti)取(qu)液注(zhu)入玻璃(li)注(zhu)射器；
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連(lian)接，調節壓力使(shi)溶液(ye)以約6mL/min流速(su)緩(huan)慢通(tong)過(guo)(guo)免疫親和(he)柱，直至2~3mL空氣通(tong)過(guo)(guo)柱體；
┅┅以10.0mL水(shui)淋洗(xi)柱(zhu)子2次，棄(qi)去(qu)全(quan)部流出液，并使2mL~3mL空氣通過(guo)柱(zhu)體；
┅┅準確加(jia)入1.0mL色(se)譜(pu)級(ji)甲醇洗脫，流速(su)為1 mL/min ~2mL/min，收集全部(bu)洗脫液于玻璃試管中，供檢測用。
（二）醬油
┅┅取50g試樣(yang)與100mL甲醇(chun)-水（8：2）溶液混合；
┅┅加入2.5g氯化鈉以均(jun)質(zhi)器高速攪拌，提取1分鐘；
┅┅4000r/min離心5min或(huo)用槽紋濾紙(zhi)過濾；
┅┅取10mL濾(lv)液并(bing)加入40mL水稀(xi)釋，用玻璃微纖維濾(lv)紙過(guo)濾(lv)
┅┅取稀釋后液(ye)體待測；
┅┅將免(mian)疫親(qin)和(he)柱連(lian)接(jie)于(yu)10.0mL玻璃注射(she)器下。準確移(yi)取10.0mL樣(yang)品(pin)提(ti)取液注入(ru)玻璃注射(she)器；
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注(zhu)射器(qi)連接，調節(jie)壓力使溶液以約(yue)6mL/min流速(su)緩(huan)慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；
┅┅用(yong)10.0mL 0.1%的吐溫(wen)/PBS清(qing)洗，再以(yi)10.0mL水淋洗柱子2次，棄去全部流(liu)出液，并使2mL~3mL空氣(qi)通(tong)過柱體；
┅┅準確加入(ru)1.0mL色(se)譜級(ji)甲醇洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管(guan)中，供檢(jian)測用(yong)。
（三）食醋
┅┅取5g試樣，加(jia)入1.0g氯化鈉；
┅┅以pH7.0磷酸鹽緩沖溶液(ye)稀釋定容至25.0mL；
┅┅4000r/min離心(xin)5min或用(yong)槽(cao)紋濾紙過濾；
┅┅取(qu)10mL濾液并(bing)加入10mL水稀釋(shi)，用玻璃微纖(xian)維濾紙(zhi)過濾
┅┅取(qu)稀釋(shi)后液體(ti)待(dai)測。
┅┅將免疫親和柱(zhu)連接于10.0mL玻璃注射器下。準(zhun)確(que)移取10.0mL樣品(pin)提取液注入玻璃注射器；
┅┅將空(kong)氣壓力泵與玻璃注射器連接，調節壓力使(shi)溶液以約6mL/min流速緩(huan)慢通(tong)過(guo)免疫親和柱(zhu)(zhu)，直(zhi)至(zhi)2~3mL空(kong)氣通(tong)過(guo)柱(zhu)(zhu)體；
┅┅用10.0mL 0.1%的吐溫(wen)/PBS清洗，再以10.0mL水淋洗柱子2次，棄去全部(bu)流出液，并(bing)使2mL~3mL空(kong)氣通過柱體；
┅┅準(zhun)確加入1.0mL色譜級甲醇洗(xi)脫，流(liu)速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗(xi)脫液于玻璃試管中，供檢測用。
【結果判定】
經(jing)免疫親和柱凈(jing)化后，收集到的(de)甲醇洗脫(tuo)液(ye)可(ke)直接使用熒(ying)光(guang)計(ji)或者HPLC檢測，也可(ke)使用薄層色(se)譜或者酶聯免疫試劑(ji)盒進(jin)行檢測。收集到的(de)1mL洗脫(tuo)液(ye)中(zhong)的(de)黃(huang)曲霉毒素含量相(xiang)當于(yu)1g樣品中(zhong)黃(huang)曲霉毒素含量。
【高效(xiao)液相參考(kao)譜(pu)圖】
【注意事項】
┅┅黃(huang)曲霉毒素危害極大，應戴手套操作(zuo)。
┅┅使(shi)用(yong)過的玻(bo)璃(li)容器及黃(huang)曲霉毒(du)素溶(rong)液(ye)最好用(yong)5%濃度的次氯酸(suan)鈉溶(rong)液(ye)浸泡過夜(ye)。
┅┅不要使用過了(le)有效日期(qi)的免疫親(qin)和(he)柱(zhu)。
【貯藏條件及保存期】
貯藏條件：親和柱可于常溫(wen)保存(cun)，2-8℃儲存(cun)可延長有效期，不可凍存(cun)
保存期：該產品有效期為12個月。
